Набор реагентов "Hymenoscyphus fraxineus- РВ"

Кат. № PH-074

Hymenoscyphus fraxineus – патогенный аскомицетный гриб, вызывающий суховершинность ясеня (ash dieback), болезнь ясеней (Fraxinus excelsior, F. angustifolia) приводящую к потерям до 90% деревьев в лесах Европы (Baral et al., 2014).

Патоген происходит из Восточной Азии, где основным хозяином является ясень маньчжурский (Fraxinus mandshurica). Суховершинность ясеня зарегистрирована в Европе с1990-х годов и включена в перечень опасных заболеваний A2 List EPPO, как карантинный объект (Buschbom et al., 2014, Kowalski et al, 2016).

Основными хозяевами патогена являются растения рода Fraxinus (F.excelsior, F. angustifolia), а также некультивируемые виды, являющиеся симптомно-непроявляющимеся носителями (Chionanthus virginicus, F.ornus, F.pennsylvanica, F.americana, F.velutina) (McKinney et al.,2014, Skovsgaard et al.,2017).

Источником заражения служат аскоспоры из апотециев (белые чашечки) на отмерших листоножках предыдущего года, способные сохранять жизнеспособность до 1 года. Первичное заражение начинается в летний сезон с распространения конидий анаморфы (Chalara fraxinea) воздушно-капельным способом (Fones et al., 2016). В зимний период патоген сохраняется в некротических тканях, где на влажных остатках позже формируются апотеции, высвобождая миллиарды аскоспор на расстояние до 100 км. После распространения аскоспоры проникают через стомы листа, а мицелий распространяется по жилкам в побеги и ствол. Инкубационный период может длиться от 4 месяцев до года (Grosdidier et al., 2019, Gross et al.,2015).

Основные симптомы поражения H.fraxineus проявляются на листьях, как тёмно-бурые некрозы жилок и листовой пластины, приводящие к преждевременному пожелтению. На побегах образуются вогнутые красновато-коричневые язвы со смолой диаметром от 2 до 10 см, на стволе происходит омертвение коры и образуются продольные трещины (Madsen et al., 2021). На более поздних этапах заражения наблюдается отмирание кроны сверху вниз, на основание ствола образуются белые стромы конидий, что приводит к гибели деревьев в течение 3–10 лет (Hietala et al., 2018).

«Hymenoscyphus fraxineus - РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК Hymenoscyphus fraxineus методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения Hymenoscyphus fraxineus. Набор позволяет качественно определить, наличие в образце ДНК Hymenoscyphus fraxineus.

Набор реагентов «Hymenoscyphus fraxineus – РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Hymenoscyphus fraxineus – по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) – по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIC. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность

  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Hymenoscyphus fraxineus - РВ»— не менее 1,0 *10³ копий ДНК в миллилитре пробы.

• Специфичность

  Специфичность – ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК целевого объекта, отсутствовали, ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.

Литература:

Baral H. O., Bemmann M. Hymenoscyphus fraxineus vs. Hymenoscyphus albidus–A comparative light microscopic study on the causal agent of European ash dieback and related foliicolous, stroma-forming species //Mycology. – 2014. – Т. 5. – №. 4. – С. 228-290.

DIEBACK A. S. H. OF Chalara Fraxinea/Hymenoscyphus Pseudoalbidus //Science in Parliament. – 2013. – Т. 70. – №. 1. – С. 23.

Fones H. N., Mardon C., Gurr S. J. A role for the asexual spores in infection of Fraxinus excelsior by the ash-dieback fungus Hymenoscyphus fraxineus //Scientific Reports. – 2016. – Т. 6. – №. 1. – С. 34638.

Grosdidier M. et al. Tracking the invasion: dispersal of Hymenoscyphus fraxineus airborne inoculum at different scales //FEMS microbiology ecology. – 2018. – Т. 94. – №. 5. – С. fiy049.

Gross A., Han J. G. Hymenoscyphus fraxineus and two new Hymenoscyphus species identified in Korea //Mycological Progress. – 2015. – Т. 14. – №. 4. – С. 19.

Hietala A. M. et al. Propagule pressure build-up by the invasive Hymenoscyphus fraxineus following its introduction to an ash forest inhabited by the native Hymenoscyphus albidus //Frontiers in Plant Science. – 2018. – Т. 9. – С. 1087.

Kowalski T., Kraj W., Bednarz B. Fungi on stems and twigs in initial and advanced stages of dieback of European ash (Fraxinus excelsior) in Poland //European Journal of Forest Research. – 2016. – Т. 135. – №. 3. – С. 565-579.

Madsen C. L. et al. Combined progress in symptoms caused by Hymenoscyphus fraxineus and Armillaria species, and corresponding mortality in young and old ash trees //Forest Ecology and Management. – 2021. – Т. 491. – С. 119177.

McKinney L. V. et al. The ash dieback crisis: genetic variation in resistance can prove a long‐term solution //Plant Pathology. – 2014. – Т. 63. – №. 3. – С. 485-499.

Skovsgaard J. P. et al. Silvicultural strategies for Fraxinus excelsior in response to dieback caused by Hymenoscyphus fraxineus //Forestry: An International Journal of Forest Research. – 2017. – Т. 90. – №. 4. – С. 455-472.