| ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ КРАСИТЕЛИ: |
 |
 |
| Флуоресцеины |
 |
| Карбоксифлуоресцеин (FAM) |
 |
| MW: |
376.3 |
| Поглощение: lмакс. |
492 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
520 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
83,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.8 |
|
 |
| Области применения:
Производные флуоресцеина являются наиболее распространенными флуоресцентными метками, вводимыми в
олигонуклеотиды. Карбоксифлуоресцеин имеет достаточно большой молярный коэффициент поглощения и высокий
квантовый выход. Кроме того, максимум возбуждения для производных флуоресцеина находится в диапазоне
спектральных линий аргонового (488 нм) и Nd:YAG (477 нм) лазеров, что делает этот краситель незаменимым
в таких областях, как:
- ДНК анализ с лазер-индуцируемой флуоресцентной детекцией;
- микроскопия с конфокальным лазерным сканированием;
- проточная цитофлуориметрия.
Тем не менее, при работе с производными флуоресцеина и их конъюгатами следует учитывать их следующие
особенности:
- относительно высокая скорость выцветания;
- рН-чувствительная флуоресценция (рКа ~ 6.4), которая существенно уменьшается при рН ниже 7.0;
- относительно широкий спектр флуоресценции, ограничивающий использование производных флуоресцеина в некоторых приложениях, предусматривающих использование нескольких флуоресцентных красителей одновременно;
- возможное уменьшение интенсивности флуоресценции в составе конъюгатов с биополимерами, особенно при множественном замещении.
|
 |
| Родамины |
 |
| 6-Карбоксиродамин (R6G) |
 |
| MW: |
457.52 |
| Поглощение: lмакс. |
524 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
557 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
108,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.75 |
|
 |
| Области применения:
Красители родаминового ряда снискали широкое применение в качестве олигонуклеотидных меток. В отличие от производных флуоресцеинов,
их спектральные характеристики не меняются в диапазоне рН от 4 до 10. Карбокисродамин R6G близок по спектральным характеристикам к
6-JOE. Карбоксиродамины используются в различных молекулярно-биологических приложениях, таких как:
- автоматическое секвенирование ДНК;
- количественная ПЦР в реальном времени;
- флуоресцентная in situ гибридизация;
- детекция на ДНК-чипах.
|
 |
| Карбокси-Х-родамин (ROX) |
 |
| MW: |
534.68 |
| Поглощение: lмакс. |
580 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
605 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
82,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.8 |
|
 |
| Области применения:
Красители родаминового ряда снискали широкое применение в качестве олигонуклеотидных меток. В отличие от производных флуоресцеинов,
их спектральные характеристики не меняются в диапазоне рН от 4 до 10. Карбокси-Х-родамин в настоящее время является одним из наиболее
используемых флуоесцентных красителей родаминового ряда. Карбокси-Х-родамин используется в различных молекулярно-биологических
приложениях, таких как:
- автоматическое секвенирование ДНК;
- количественная ПЦР в реальном времени;
- флуоресцентная in situ гибридизация;
- детекция на ДНК чипах.
|
 |
| Тетраметилкарбоксиродамин (TAMRA) |
 |
| MW: |
431 |
| Поглощение: lмакс. |
546 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
576 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
95,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.7 |
|
 |
| Области применения:
Красители родаминового ряда снискали широкое применение в качестве олигонуклеотидных меток. В отличие от производных флуоресцеинов, их
спектральные характеристики не меняются в диапазоне рН от 4 до 10. Тетраметилкарбоксиродамин в настоящее время является наиболее
используемым флуоресцентным красителем родаминового ряда. Прежде всего, необходимо отметить, что TAMRA используется в качестве
акцептора флуоресценции в зондах, применяемых для проведения количественного ПЦР в реальном времени. Среди других
молекулярно-биологических приложений, в которых используются олигонуклеотиды, меченные этим красителем следует отметить:
- секвенирование ДНК;
- флуоресцентная in situ гибридизация;
- детекция на ДНК чипах.
|
 |
| 6-Карбокси-4',5'-дихлор-2',7'-диметоксифлуоресцеин (6-JOE) |
 |
| MW: |
390.26 |
| Поглощение: lмакс. |
520 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
548 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
75,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.75 |
|
 |
| Области применения:
6-Карбокси-4',5'-дихлор-2',7'-диметоксифлуоресцеин (6-JOE) - один из флуорофоров (таких как 5-FAM, 6-TAMRA
и 6-ROX), традиционно используемых при автоматическом секвенировании ДНК. Химическая модификация ксантенового кольца смещает максимумы
поглощения и флуоресценции этого производного флуоресцеина в длинноволновую область. Промежуточный по сравнению с другими красителями спектр
поглощения/флуоресценции 6-JOE, высокий квантовый выход и низкая чувствительность к изменению рН (рКа ~4.3) в диапазоне близком к физиологическому, позволяют
использовать этот краситель для целого ряда молекулярно-биологических приложений. |
 |
| Карбоксиродамин (R110) |
 |
| MW: |
374.3 |
| Поглощение: lмакс. |
503 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
528 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
74,000 M-1*см-1 |
| Квантовый выход |
~ 0.7 |
|
 |
| Области применения:
Красители родаминового ряда снискали широкое применение в качестве олигонуклеотидных меток. В отличие от производных
флуоресцеинов, их спектральные характеристики не меняются в диапазоне рН от 4 до 10. Карбоксиродамины используются в
различных молекулярно-биологических приложениях, таких как:
- автоматическое секвенирование ДНК;
- количественная ПЦР в реальном времени.
|
| Прочие красители |
 |
| Dansyl |
 |
| MW: |
387.37 |
| Поглощение: lмакс. |
335 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
518 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
4,200 M-1*см-1 |
|
 |
| Acridine |
| MW: |
467.86 |
| Поглощение: lмакс. |
421 нм |
| Флуоресценция*: lмакс. |
497 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
11,120 M-1*см-1 |
|
 |
| * Для Acridine флуоресция значительно разгорается при интеркаляции в двойную спираль ДНК. |
 |
| Pyrene |
 |
| MW: |
385.42 |
| Поглощение: lмакс. |
340 нм |
| Флуоресценция: lмакс. |
376 нм |
| Молярный коэффициент поглощения при lмакс. |
43,000 M-1*см-1 |
|
 |
| Области применения:
Будучи сближены в пространстве, производные пиренов формируют эксимер. При этом пик флуоресценции эксимера отличен от пика
флуоресценции одиночного красителя (470нм - эксимер, 376нм - пирен). Это свойство пиренов активно используют для проведения
структурных исследований нуклеиновых кислот. |
 |