Тиофосфатные олигонуклеотиды используются в антисенсовой биотехнологии как регуляторы
экспрессии генов. Они обладают повышенной устойчивостью к действию клеточных нуклеаз по сравнению с немодифицированными
олигонуклеотидами. Структура:
ФосфодиэфирныйТиофосфатный олигонуклеотид
Синтез тиофосфатных олигонуклеотидов осуществляется на автоматическом синтезаторе амидофосфитным
методом с использованием серусодержащего окислителя на стадии окисления. Метод позволяет синтезировать олигонуклеотиды, содержащие
фосфотиоатную связь в любом положении олигонуклеотидной цепи. В результате синтеза получается 2n диастереоизимеров (n-число фосфотиоатных
связей). Метод ВЭЖХ и гель-электрофореза, используемые для очистки олигонуклеотидов, не позволяют разделить изомеры. Технология синтеза
позволяет получать любые количества тиофосфатных олигонуклеотидов. По завершении синтеза олигонуклеотид снимается с полимерного носителя,
с него удаляются защитные группы (стадия деблокирования), и далее он подвергается очистке с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ
или электрофореза в полиакриламидном геле.
Физико-химические свойства:
Изомеры обладают различными гибридизационными свойствами. Благодаря большему молекулярному весу серы по сравнению с кислородом, тиофосфатные
олигонуклеотиды обладают меньшей подвижностью в полиакриламидном геле. Они более гиброфобны и поэтому имеют большие времена задерживания на
колонке, чем немодифицированные олигонуклеотиды. Тиофосфатные олигонуклеотиды плохо фосфорилируются полинуклеотидкиназой (5-10% р32-меченого
продукта). Тиофосфатные олигонуклетиды формируют менее прочную двойную спираль с РНК и ДНК, чем их немодифицированные аналоги.
Тиофосфатные
