| НАБОРЫ РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ: |
 |
 |
Тромбофилия.
Диагностика наследственной предрасположенности методом ПЦР-РВ.
Наборы реагентов "SNP-Скрин" |
|
Компанией Синтол разработаны наборы реагентов «SNP-Скрин» для обнаружения SNP, определяющих наследственную предрасположенность к тромбофилии:
- полиморфизм G1691A гена фактора V свёртывания крови (фактор Лейден)
- полиморфизм C677T гена метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR
- полиморфизм G20210A гена протромбина
- полиморфизм -675 5G/4G гена ингибитора активатора плазминогена (PAI-1)
- полиморфизм V34L гена F13A1 фактора ХIII свёртывания крови
- полиморфизм A1298C гена метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR
- полиморфизм T1565C гена GpIIIa гликопротеина IIIa
- полиморфизм G-455A гена β-фибриногена FGB
|
|
| Набор реагентов для определения полиморфизма G1691A гена фактора V (фактор Лейден) свёртывания крови |
 |
| Пример анализа образцов на определение полиморфизма G1691A (Arg506Gln) Factor V Leiden на приборе для ПЦР в реальном времени АНК-32. |
| |
Wild-type образец, «норма» (генотип G/G). Рост сигнала флуоресценции наблюдается по каналу красителя FAM. |
| |
Гетерозиготный образец (генотип G/A). Рост сигнала флуоресценции наблюдается по каналам красителей FAM и R6G. |
| |
Mutant-type гомозиготный образец (генотип А/А). Рост сигнала флуоресценции наблюдается по каналу красителя R6G. |
|
|
| В наборах для определения SNP используется метод ПЦР в реальном времени с аллель-специфичными зондами. Два аллель-специфичных зонда позволяют раздельно детектировать продукты ПЦР на двух каналах флуоресценции. Результаты реакции на двух каналах позволяют однозначно определить присутствие каждого из аллелей исследуемого полиморфизма. |
Для выделения ДНК нами разработаны:
«К-Сорб» - набор реагентов для быстрого (30-45 минут) выделения ДНК на микроколонках. Позволяет выделить тотальную ДНК из крови, плазмы, слюны, мочи, культуры клеток и любых осадков клеток в буфере.
Выход ДНК из 200 мкл цельной крови составляет в среднем 5-6 мкг с соотношением А260/А280 = 1,8-1,9
«ДНК-Экстран» - набор реагентов для выделения геномной ДНК из образцов цельной крови, костного мозга и клеточных культур.
Выход ДНК составляет 7-12 мкг из 100-300 мкл цельной крови с соотношением А260/А280 = 1,8-1,9 |
| Ген |
Поли-
морфизм |
Частота встречаемости |
Клиническое значение |
F5
ген фактора V свёртывания крови(фактор Лейден) |
G1691A |
гетерозиготы – 2-15% в европейской популяции |
высокий риск тромбозов, системной эндотелиопатии, у женщин - необъяснимое бесплодие, повышенный риск выкидышей, гестозов, преэклампсии, внутриутробной гибели плода, отставания развития плода, фетоплацентарной недостаточности, отслойки плаценты и др. |
MTHFR
ген метилен-тетрагидрофо-латредуктазы |
C677T |
гетерозиготы – 40-56%,
гомозиготы Т/Т – 10-13%
в европейской популяции |
повышенный риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, колоректальной аденомы, склонность к тромбозам, у женщин – необъяснимое бесплодие, повышенный риск выкидышей, гестозов, преэклампсии, антенатальной гибели плода, задержки внутриутробного развития плода, дефектов развития плода, эндотелиальной дисфункции при беременности, отслойки плаценты, повышенный риск рака молочной железы у женщин старше 55 лет |
MTHFR
ген метилен-тетрагидрофо-латредуктазы |
A1298C |
гетерозиготы - 40-50%,
гомозиготы – 5-10%
в европейской популяции |
в сочетании с лейденовской мутацией G1691A резко увеличивает риск венозных тромбозов; у женщин – привычное невынашивание беременности, гестозы; у детей – гомозигот С/С – повышенный риск эмбриональных опухолей ЦНС |
F2
ген протром-бина |
G20210A |
гетерозиготы – 2-3%
в европейской популяции |
склонность к тромбообразованию, риск развития тромбоэмболии лёгочной артерии, риск смерти в послеоперационный период, у женщин – необъяснимое бесплодие, риск невынашивания беременности, гестозов, преэклампсии, фетоплацентарной недостаточности, внутриутробной гибели плода, задержки развития плода, отслойки плаценты |
PAI-1
ген ингибитора активатора плазминогена |
-675 5G/4G |
гомозиготы 4G/4G – 5-8% в европейской популяции |
высокий риск тромбозов, у гомозигот 4G/4G увеличен риск развития инфаркта миокарда, инсульта, риск развития ожирения и инсулинорезистентности, у женщин – ранние и поздние выкидыши, гестозы, преэклампсия, фетоплацентарная недостаточность, отслойка плаценты |
F13A1
ген фактора XIII свёртывания крови |
V34L |
гетерозиготы – 20-30%,
гомозиготы – 5-10%
в европейской популяции |
снижает риск развития венозных тромбозов, инфаркта миокарда и инсульта (небольшой протективный эффект) |
GpIIIa
ген глико-протеина IIIa |
T1565C |
гетерозиготы – 40-50%, гомозиготы – 6-7% |
гомозиготы T/T – предрасположенность к гиперплазиям репродуктивной системы (миома матки, эндометриоз), риск аденомиоза у больных с миомой матки; гетерозиготы и гомозиготы С/С – риск атеросклероза и ИБС, риск рака мочевого пузыря и рака простаты, у женщин - риск задержки развития плода, повышена вероятность кровотечения при родах, у женщин до 45 лет – носителей аллеля 1565С - увеличен риск рака молочной железы |
FGB
ген β-фибри-ногена |
-455G/A |
гетерозиготы – 25%, гомозиготы – 5-10%в европейской популяции |
снижает риск венозных тромбозов, у гомозигот -455А снижен риск развития инфаркта миокарда |
|
Тромбофилия.Диагностика наследственной предрасположенности