Набор реагентов «Pepino mosaic virus-РВ»
Кат. № PH-045
Вирус мозаики пепино является представителем семейства Potexvirus. Впервые был описан в 1980 г. (Jones et al., 1980) при выделении из растений пепино (Solanum muricatum). С момента первого обнаружения получил широкое распространение по всему миру и в 1999 г. был впервые выявлен в Европе, в настоящее время распространен в большинстве стран ЕОКЗР. РерМV входит в список ограничено распространенных карантинных видов – А2 ЕОКЗР (Шнейдер Ю.А., Приходько Ю.Н., 2013).
Вирус мозаики пепино имеет достаточно узкий круг растений-хозяев и в первую очередь поражает пасленовые. Основными растениями-хозяевами являются томаты и пепино, кроме того, вирус поражает баклажан, картофель, перец, табак.
Степень заражения растений варьируется от незначительной до тяжелой в зависимости от штамма вируса и внешних условий: в осенние и зимние месяцы, когда уровень освещенности и температура несколько ниже, симптомы заражения проявляются наиболее ярко (Jorda et al., 2001). В настоящее время обнаружено 4 штамма вируса пепино, инфицирование которыми сопровождается сильной дифференциацией симптомов проявления заболевания на растениях и плодах (Шнейдер Ю.А., Приходько Ю.Н., 2013). Основные симптомы - мраморность, неравномерная окраска, обесцвечивание, иногда растрескивание плодов и их деформация. Для листьев характерна мозаичная окраска, хлороз, деформация, пузырчатость.
PepMV обладает высокой вирулентностью и в основном передается механически через зараженные инструменты, обувь, одежду, руки и контакт между растениями (Pospieszny and Borodynko, 2002). Плоды, листья и кони могут содержать значительные концентрации вируса. При повреждении или гибели последних, вирусные частицы могут попадать в почву или сточные воды, что так же способствует дальнейшему распространению инфекции. Вирус способен сохраняться на внешней оболочке семян, полученных от инфицированных растений.
Переносчиками вируса являются тли (Myzus persicae) и белокрылки (Trialeurodes vaporariorum), а также, как показали эксперименты в теплице, векторами могут выступать некоторые виды шмелей-опылителей (Bombus terrestris, B. canariensis и B. Impatiens) (Jones et al., 1980; Loomans et al., 2000).
«ФИТОСКРИН» — технология быстрой молекулярно-генетической диагностики заболеваний растений методом ПЦР в реальном времени
«Pepino mosaic virus-РВ»
Набор реагентов для выявления РНК вируса мозаики пепино методом полимеразной цепной реакции в реальном времени совмещенной с реакцией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР-РВ)
Диагностика растений на наличие вируса с помощью набора «Pepino mosaic virus-РВ» возможна на всех этапах его вегетационного развития методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ).
Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль карантинного фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения РНК вируса мозаики пепино. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце РНК Pepino mosaic virus.
Проведение реакции обратной транскрипции и последующей мультиплексной ПЦР-РВ в наборе реагентов «Pepino mosaic virus-РВ» осуществляется последовательно в одной пробирке в течение одного запуска амплификатора без каких-либо дополнительных манипуляций. Набор реагентов «Pepino mosaic virus-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент Pepino mosaic virus по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль – по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow.
Первая реакция позволяет обнаружить последовательность специфического фрагмента РНК вируса коричневой морщинистости плодов томата. Вторая реакция – ВПК (Внутреннего Положительного Контроля) – необходима для исключения ложноотрицательных результатов.
- Специфичность
Специфичность – ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих РНК вирусов, отсутствовали, ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК растений и РНК вирусов, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.
Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия).
