Для диагностики туберкулёза


Наборы реагентов «Амплитуб» для быстрой диагностики туберкулёза, в том числе с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ, ШЛУ-ТБ).

tuberkulez.jpg

В 2004 году по инициативе д.м.н., профессора Михаила Александровича Владимирского, заведующего сектором молекулярной диагностики туберкулёза НИИ Фтизиопульмонологии Первого МГМУ им. И.М.Сеченова, мы начали разработки в области ПЦР-диагностики туберкулёза.
«Амплитуб» — технология быстрой молекулярно-генетической диагностики туберкулёза для выявления микобактерий туберкулёзного комплекса, определения инфекционной опасности больного, определения антибиотикоустойчивости к препаратам I и II ряда, идентификации и генотипирования микобактерий.



Технология «Амплитуб» состоит из 3-х основных этапов: пробоподготовки, выделения ДНК и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Оригинальные технологические разработки нашей компании применяются на каждом из этих этапов и в совокупности обеспечивают высочайшую чувствительность, специфичность и информативность анализа, быстроту получения результатов и их высокую достоверность.

I этап

Пробоподготовка: в процессе инкубации с «Инактивирующим реагентом А» происходит инактивация микобактерий, разжижение и гомогенизация респираторных образцов.

II этап

Выделение ДНК: использование оригинальных реагентов и магнитных частиц обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК и позволяет автоматизировать процесс выделения ДНК.

III этап

ПЦР в реальном времени: одновременная детекция нескольких различных участков генома комплекса микобактерий туберкулёза (МБТ) увеличивает информативность и достоверность анализа.


Преимущества технологии «АМПЛИТУБ»

Скорость

Технология «Амплитуб» позволяет сократить время, необходимое для обнаружения M.tuberculosis complex и определения лекарственной устойчивости с 1-3 месяцев до 1 дня в сравнении с традиционными культуральными методами.

Высокая достоверность результатов

Высокая достоверность результатов обеспечивается как на этапе обнаружения МБТ, так и на этапе определения антибиотикоустойчивости. Применение технологии «Амплитуб» позволяет обнаружить МБТ с высокой чувствительностью (не более 100 КОЕ/мл мокроты) и 100% специфичностью. Точное определение мутаций в наиболее значимых кодонах основных генов, ассоциирующихся с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду, позволяет определить 90% антибиотикоустойчивых образцов со специфичностью, близкой к 100%

Безопасность

Клинические образцы инактивируются с помощью «Инактивирующего реагента А» уже на этапе взятия и транспортировки биологического материала.

Возможность работы с клиническими образцами

Важным преимуществом технологии «Амплитуб» является возможность исследования не только культур микобактерий, но и непосредственно клинического материала (мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей).

Автоматизация

Роботизированная станция TECAN и набор реагентов «М-Сорб-Туб-Автомат» позволяют полностью автоматизировать наиболее трудоёмкий этап выделения ДНК. Технология «Амплитуб» обеспечивает автоматический расчет результатов ПЦР-анализа с указанием количества выявленного возбудителя в образце и конкретных мутаций, определяющих устойчивость к антибиотикам.


I этап - Пробоподготовка, инактивация

«Амплитуб-Преп» (инактивирующий реагент) специально адаптирован для обработки мокроты. Обладает исключительными муколизирующими свойствами, благодаря которым может использоваться вместо раствора NALC-NaOH для обработки мокроты перед молекулярно-генетическими исследованиями.

Amplitub-Prep

Клинические и технические испытания «Амплитуб-Преп» (инактивирующего реагента) проводились в ЦНИИ туберкулёза (Москва). 118 образцов мокроты от тяжёлых бациллярных больных с острым течением туберкулёза делили на две части, обрабатывали одну часть «Амплитуб-Преп», другую — NALC-NaOH.
Все образцы тестировали на BACTEC MGIT 960 и методом ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Рост микобактерий наблюдался только в контрольной группе, обработанной NALC-NaOH. В образцах, обработанных «Амплитуб-Преп», рост микобактерий не обнаружен. Результаты ПЦР-анализа образцов из обеих групп были положительными.

shema

II этап - Выделение ДНК

Компанией «Синтол» разработан ряд наборов реагентов для выделения ДНК микобактерий.

«М-Сорб-Туб»

набор реагентов для выделения ДНК (на магнитных частицах)

  • Адаптирован для выделения ДНК микобактерий из мокроты, промывных вод бронхов, спинномозговой жидкости, экссудата, пунктата, биоптата, мочи, отделяемого половых путей, культур клеток.
  • Набор «М-Сорб-Туб» обеспечивает лизис клеток, сорбцию ДНК на магнитных частицах, осаждение ДНК центрифугированием, промывку и элюцию ДНК.
  • Предлагаемая компанией «Синтол» методика выделения ДНК сочетает в себе достоинства сорбционного метода и метода осаждения спиртом.
  • Использование в качестве сорбента покрытых оксидом кремния магнитных частиц более удобно в сравнении с использованием других сорбентов, позволяет максимально стандартизировать и автоматизировать методику выделения ДНК.
  • В каждый исследуемый образец добавляется внутренний положительный контроль (ВПК), по реакции амплификации ВПК судят о наличии/отсутствии ингибиторов ПЦР и эффективности выделения ДНК.

«М-Сорб-Туб-Автомат»

набор реагентов для выделения ДНК микобактерий из клинических образцов и культур клеток на автоматизированных станциях TECAN

t8.png

Набор представляет собой модификацию набора реагентов «М-Сорб-Туб», разработанную специально для использования на автоматизированных станциях фирмы TECAN, что обеспечивает ряд следующих преимуществ.

  • Снижение риска контаминации во время выделения ДНК практически до нуля.
  • Значительное уменьшение трудоёмкости процесса выделения ДНК.
  • Стандартизированное выделение ДНК из клинических образцов.
  • Экономическая выгода: низкий расход пластика и реактивов.

«Экстра-Туб»

набор реагентов для ускоренной пробоподготовки и выделения ДНК микобактерий из образцов мокроты

  • Совмещение процесса пробоподготовки и выделения ДНК из образцов мокроты позволяет провести эти два этапа работы за 1 час.
  • Минимальное количество манипуляций при пробоподготовке и выделении ДНК. Набор состоит из 3 рабочих растворов: «Амплитуб-Преп», лизирующего и элюирующего растворов.
  • Использование «Амплитуб-Преп» в составе набора «Экстра-Туб» позволяет увеличить выход ДНК в 5-10 раз.


III этап - ПЦР в реальном времени

Обнаружение и количественное определение комплекса МБТ
Набор реагентов АМПЛИТУБ-РВ – это:
  • высокая достоверность анализа благодаря одновременному обнаружению двух специфичных генов M.tuberculosis complex: IS6110 и regX3;
  • оценка пригодности образца ДНК для определения антибиотикоустойчивости;
  • высокая чувствительность (не более 100 КОЕ/мл мокроты или 1-10 копий фрагментов ДНК в реакции) и 100%-ая специфичность, подтверждённые на панели QCMD (Quality Control for Molecular Diagnostics) Mtb EQA (UK).
Определение антибиотикоустойчивости МБТ к препаратам I и II ряда
Наборы реагентов АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ, АМПЛИТУБ- ШЛУ-РВ – это:
  • диагностика форм туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ);
  • быстрая детекция мутаций M.tuberculosis, ассоциирующихся с устойчивостью к антибиотикам первого и второго ряда (рифампицину, изониазиду, этамбутолу, фторхинолонам);
  • достоверность результатов, ежегодно подтверждаемая при проведении Федеральной службой внешней оценки качества (ФСВОК) Росздравнадзора испытаний шифрованных тест-культур и образцов.
Дифференциация внутри M. tuberculosis complex
АМПЛИТУБ-ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ — набор реагентов для дифференциации видов микобактерий, входящих в M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG и др. видов).

Генотипирование микобактерий
АМПЛИТУБ-Beijing — набор реагентов для определения генотипа Beijing микобактерий туберкулёза.

t9.png

Наборы АМПЛИТУБ-МЛУ-РВ и АМПЛИТУБ-ШЛУ- РВ основаны на использовании оригинальной мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени, позволяющей выявлять мутации в генах микобактерий туберкулеза, ответственных за устойчивость к конкретным антибиотикам.

Принцип мультиконкурентной аллель-специфичной методики ПЦР в реальном времени.
  • tub-shema3.jpgВ формате одной пробирки используются 5’-флуоресцентно-меченые аллель-специфичные праймеры с общим комплементарным им 3’-меченым олигонуклеотидом-гасителем и контрольный флуоресцентный зонд, комплементарный участку ДНК без мутаций.
  • При отсутствии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается только по флуорофору зонда.
  • При наличии мутаций в ДНК нарастание флуоресценции в ходе ПЦР-РВ наблюдается как по флуорофору зонда, так и по флуорофору 5’-флуоресцентно-меченого аллель-специфичного праймера. Данный метод позволяет определить не только точку мутации, но и процент устойчивого мутантного штамма МБТ на фоне дикого.

Использование автоматизированных станций Freedom EVO (TECAN, Швейцария) для молекулярно-генетической диагностики туберкулёза

В 2011 году по инициативе сотрудников лаборатории молекулярно-генетических методов исследования ЦНИИТ РАМН группа разработчиков из ЦНИИТ под руководством профессора Черноусовой Ларисы Николаевны и «Синтола» впервые в России внедрила в лабораторную практику высокопроизводительную автоматизи-рованную систему выделения ДНК микобактерий на платформе Freedom EVO (TECAN) с использованием наборов реагентов «Амплитуб». Это позволило значительно сократить трудоёмкость ПЦР-диагностики туберкулёза и увеличить поток анализов.

tub-shema2.jpg

Время анализа МБТ при использовании автоматизированных станций Freedom EVO («TECAN», Швейцария) и наборов реагентов «Амплитуб» («СИНТОЛ», Россия)

t13.png
Трудозатраты - 1 час
Продолжительность выделения ДНК – не более 2 часов
Подготовка к амплификации и ПЦР-РВ – 1,5 часа

ИТОГО: результаты анализа будут готовы через 3,5 часа
Оператор затратит 1 час своего рабочего времени.


Устройство автоматизированной станции Freedom EVO («TECAN», Швейцария) показано ниже:

t14.png

Выбирая технологию «Амплитуб» («Синтол») на платформе Freedom EVO («TECAN»),
Вы получаете:
  • Обнаружение возбудителя туберкулёза – 48 образцов за 3 часа
  • Определение лекарственной устойчивости к препаратам I и II ряда за 1 день
  • Уменьшение трудозатрат в 6 раз
  • Увеличение производительности лаборатории
  • Безопасность работы благодаря «Инактивирующему реагенту А»
  • Стандартизованное выделение ДНК
  • Снижение риска контаминации лаборатории
  • Низкую себестоимость 1 анализа
  • Признательность фтизиатров за быструю и точную диагностику!
Документы
Загрузить брошюру "Молекулярно-генетическая диагностика туберкулёза методом ПЦР в реальном времени"
Загрузить брошюру "Быстро обнаружить - успешно вылечить!"

Вернуться в раздел