Для выявления ФИТОПАТОГЕНОВ

Наборы реагентов «ФИТОСКРИН» для выявления фитопатогенов методом ПЦР в реальном времени

«ФИТОСКРИН» — стремительно развивающаяся технология быстрой молекулярно-генетической диагностики заболеваний растений методом ПЦР в реальном времени.

Технология состоит из 3-х основных этапов:

I этап

Предварительная подготовка и выделение ДНК/РНК: использование оригинальных реагентов и сорбирующих частиц в наборах для выделения НК обеспечивает получение максимального количества чистой ДНК/РНК и позволяет автоматизировать процесс выделения нуклеиновых кислот.

Для эффективной гомогенизации растительных образцов мы предлагаем набор реагентов «ФитоСорб‑П», содержащий пробирки с экстрагирующим буфером и керамическими шариками для гомогенизации на гомогенизаторе Precellys Evolution или аналогичных.

Набор реагентов «Фитоскрин-Экспресс» поддерживает тенденцию к автоматизации лабораторного процесса и позволяет увеличить пропускную способность диагностических лабораторий путем выделения нуклеиновых кислот из растительного материала как ручным способом, так и на автоматизированных станциях KingFisher Flex System или/и их аналогах. «Фитоскрин-Экспресс» 96 образцов – 36 минут.

Преимущества:

1. Качество и эффективность выделения НК
2. Время выделения НК
3. Минимальный расход пластика при выделении НК
4. Стоимость наборов реагентов
5. Автоматизация выделения НК

1 — только для образцов с низким содержанием вторичных метаболитов (картофель, овощные)

2 — хорошо подходит для выделения высокобелковых и образцов с высоким содержанием вторичных метаболитов (бобовые, зерновые, виноград, плодово-ягодные)

3 — подходит для образцов с высоким содержанием вторичных метаболитов (виноград, плодово-ягодные)

4 — подходит для простых для выделения НК образцов (культуры грибов/бактерий, выделение ДНК из молодых листьев) НЕ ПОДХОДИТ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ РНК ВИРУСОВ!

II этап

ПЦР в реальном времени: обнаружение ДНК/РНК фитопатогенов.

Преимущества:

1. Реакции обратной транскрипции и ПЦР при выявлении РНК-содержащих вирусов и вироидов проводятся совместно в одной пробирке, что позволяет уменьшить вероятность ошибок при постановках реакций и контаминации, а также расход пластика
2. Наборы ПЦР-реагентов адаптированы для наиболее распространённых в России приборов для ПЦР в реальном времени («АНК-32/М/48» (ИАП РАН, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), «Rotor Gene 6000/Q» (Qiagen), «DT Prime/Lite» («ДНК-технология», Россия), «LightCycler96» («Roche», Германия), «QuantStudio5» (Applied Biosystems™, США).
3. Чувствительность наборов реагентов составляет от 1 до 20 копий ДНК/кДНК на реакцию
4. Специфичность ПЦР-РВ подтверждена на большой выборке из близкородственных и сопутствующих организмов. Образцы получены из российских и международных коллекций микроорганизмов и вирусов, видовая принадлежность которых подтверждена секвенированием по Сенгеру
5. При разработке наборов реагентов ПЦР-РВ для выявления фитопатогенов проводится сравнение с рекомендованными EPPO и ВНИИКР праймерамиdoi: 10.15389/agrobiology.2020.1.194rusЧерным цветом выделена смесь «Ph.solani-ВПК» (ООО «Синтол»); красным и оранжевым системы праймеров и зондов рекомендуемые EPPO для диагностики Candidatus Phytoplasma solani, BNrt* и mapBN** соответственно.

* Angelini E., Luca Bianchi G. Filippin L., Morassutti C., Borgo M. A new TaqMan method for the identification of phytoplasmas associated with grapevine yellows by real-time PCR assay. Journal of Microbiological methods, 2007 Jan., 68(3): 613-622 (doi:10.1016/j.mimet.2006.11.015)

** Pelletier C., Salar P., Gillet J., Cloquemin G., Very P., Foissac X., Malembic-Maher S. Triplex real-time PCR assay for sensitive and simultaneous detection of grapevine phytoplasmas of the 16SrV and 16SrXII-A groups with an endogenous analytical control. Vitis, 2009, 48(2): 87–95.

III этап

Анализ результатов. Автоматическая обработка результатов анализа на приборах для ПЦР в реальном времени АНК 32/48 (ИАП РАН, Россия): программное обеспечение позволяет автоматически формировать протоколы исследований с интерпретацией полученных результатов.

Для упрощения работы и анализа результатов с использованием прибора для ПЦР в реальном времени «QuantStudio5» (Applied Biosystems™, США) Вы можете воспользоваться таблицами .xls для ввода и вывода данных по образцам (актуально для программ QuantStudio™ Design & Analysis Software v.1.5.1 и v.1.5.2) и программой запуска прибора.

ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА

*Карантинный патоген растений

Вы можете заказать у нас разработку наборов реагентов для выявления интересующих Вас фитопатогенов.

Компания «Синтол» проводит комплексное оснащение ПЦР-лабораторий для диагностики заболеваний растений. Обучение методу ПЦР в реальном времени и технологии «ФИТОСКРИН» проводится на базе Всероссийского научно исследовательского института сельскохозяйственной биотехнологии.